ELISA (ферментно-пов’язаний імуносорбентний аналіз) є імуноферментним серологічним тестом, методологія якого заснована на реакціях антиген-антитіло, що виявляються за допомогою ферментативних реакцій. Існує різні ІФА набори TestLine, і вони включають тести з використанням антитіл як реагентів. Ферментні імуноаналізи, подібні до цих, використовують ферменти, приєднані до одного з реагентів.
Наявність антигенів та/або антитіл у клінічному зразку виявляють за забарвленням з додаванням ферментного субстрату та хромогенної речовини, що свідчить про позитивну реакцію. Ферменти, що найчастіше використовуються як маркери в ІФА, являють собою пероксидазу і лужну фосфатазу.
Тест ELISA був розроблений та описаний Пітером Перлманном та Євою Енгвалл зі Стокгольмського університету, Швеція, у 1971 році, коли вони продемонстрували кількісний вимір IgG у сироватці кроликів з використанням ферменту лужної фосфатази як маркер.
До появи ІФА в методах імунологічного аналізу використовували радіоактивні маркери, що створювало ризики для здоров’я пацієнтів. Потім ІФА стає альтернативним імуноферментним методом, техніка якого дозволяє аналізувати зразки білків, іммобілізованих у лунках мікропланшета, з використанням специфічних антитіл та ферментів як маркерів.
Крім того, це дуже чутливий простий у застосуванні та безпосередньо застосовний до зібраних серологічних зразків.
Як проводиться ІФА-тест?
Щоб провести імуноферментний тест, метод у його простій формі необхідно виконати такі кроки:
- Реагент з’єднаний із твердою фазою, зазвичай пластиковою пластиною у вигляді кількох невеликих лунок.
- Додавання реагентів, тобто. сироватки як клінічний зразок. Саме на цьому етапі відбувається розпізнавання антиген-антитіло, якщо є специфічність. Додане антитіло ПРИЄДНАЄТЬСЯ ДО ФЕРМЕНТУ.
- Після періоду інкубації поділ зв’язаних та вільних реагентів, які згодом додаються до твердої фази, виконується шляхом простої стадії промивання.
- Ферментативна реакція використовується для отримання кольору та кількісного визначення реакції шляхом додавання специфічного субстрату для ферменту.
- Зчитування результатів здійснюється шляхом вимірювання ферментативної дії на хромогенний субстрат, що призводить до зміни кольору розчину за наявності реакції антиген-антитіло, що налаштовує на позитивний результат.
Будь-яка форма або поверхня молекули, які можуть бути розпізнані антитілом, становлять антигенну детермінанту або епітоп. Полівалентні антигени містять кілька ідентичних епітопів, з якими можуть зв’язуватись ідентичні молекули антитіл. Функції антитіл залежать від їхньої здатності специфічно зв’язуватися з антигенами. Через це специфічне зв’язування антиген-антитіло досягається точність тесту ELISA.
