ELISA: як проводиться серологічний тест

ELISA (ферментно-пов’язаний імуносорбентний аналіз) є імуноферментним серологічним тестом, методологія якого заснована на реакціях антиген-антитіло, що виявляються за допомогою ферментативних реакцій. Існує різні ІФА набори TestLine, і вони включають тести з використанням антитіл як реагентів. Ферментні імуноаналізи, подібні до цих, використовують ферменти, приєднані до одного з реагентів.

Наявність антигенів та/або антитіл у клінічному зразку виявляють за забарвленням з додаванням ферментного субстрату та хромогенної речовини, що свідчить про позитивну реакцію. Ферменти, що найчастіше використовуються як маркери в ІФА, являють собою пероксидазу і лужну фосфатазу.

Тест ELISA був розроблений та описаний Пітером Перлманном та Євою Енгвалл зі Стокгольмського університету, Швеція, у 1971 році, коли вони продемонстрували кількісний вимір IgG у сироватці кроликів з використанням ферменту лужної фосфатази як маркер.

До появи ІФА в методах імунологічного аналізу використовували радіоактивні маркери, що створювало ризики для здоров’я пацієнтів. Потім ІФА стає альтернативним імуноферментним методом, техніка якого дозволяє аналізувати зразки білків, іммобілізованих у лунках мікропланшета, з використанням специфічних антитіл та ферментів як маркерів.

Крім того, це дуже чутливий простий у застосуванні та безпосередньо застосовний до зібраних серологічних зразків.

   Як проводиться ІФА-тест?

Щоб провести імуноферментний тест, метод у його простій формі необхідно виконати такі кроки:

1. Реагент з’єднаний із твердою фазою, зазвичай пластиковою пластиною у вигляді кількох невеликих лунок.
2. Додавання реагентів, тобто. сироватки як клінічний зразок. Саме на цьому етапі відбувається розпізнавання антиген-антитіло, якщо є специфічність. Додане антитіло ПРИЄДНАЄТЬСЯ ДО ФЕРМЕНТУ.
3. Після періоду інкубації поділ зв’язаних та вільних реагентів, які згодом додаються до твердої фази, виконується шляхом простої стадії промивання.
4. Ферментативна реакція використовується для отримання кольору та кількісного визначення реакції шляхом додавання специфічного субстрату для ферменту.
5. Зчитування результатів здійснюється шляхом вимірювання ферментативної дії на хромогенний субстрат, що призводить до зміни кольору розчину за наявності реакції антиген-антитіло, що налаштовує на позитивний результат.

Будь-яка форма або поверхня молекули, які можуть бути розпізнані антитілом, становлять антигенну детермінанту або епітоп. Полівалентні антигени містять кілька ідентичних епітопів, з якими можуть зв’язуватись ідентичні молекули антитіл. Функції антитіл залежать від їхньої здатності специфічно зв’язуватися з антигенами. Через це специфічне зв’язування антиген-антитіло досягається точність тесту ELISA.